样本处理方法：
组织样本：切割样本后，称取重量。加入一定量预冷的 PBS ，缓冲液中可加入 1 μg/L 蛋白酶抑制剂或50 U/mL的Aprotinin（ 抑肽酶）。用手工或匀浆器将样本匀浆充分。1000 ×g离心20 分钟左右。收集上清并分装，置于-20℃或-70℃保存。如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。没有针对所有样本类型的最佳方法，客户参考报道文献的处理方法进行样本处理
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。1000×g离心20分钟左右。收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100万 /mL左右。通过反复冻融，以使细胞膜破坏并释放出细胞内成份。1000×g离心 20 分钟左右。收集上清。保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。
血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
一、夹心法
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品100ul，轻轻混匀，酶标板加上盖，37℃温育120分钟。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。直接每孔加检测溶液A工作液 100ul，轻轻晃动混匀，酶标板加上覆膜,，37℃温育60分钟。
3. 弃去液体，甩干，洗板 3次。每次浸泡1-2分钟，大约350-400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4. 每孔加检测溶液B工作液 100ul，酶标板加上覆膜37℃温育60分钟，洗板5次（方法同3）。
5. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（时间应严格控制在10-20分钟之间，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显）。
6. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
7. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。
注意：具体操作步骤以产品说明书为准
二、竞争法
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 50μl，余孔分别加标准品或待测样品50μl
2. 立即在每个孔中加入检测溶液A工作液 50μl，轻轻晃动混匀，酶标板加上覆膜,37℃温育60分钟。
3. 弃去液体，甩干，洗板 3次。每次浸泡1-2分钟，大约350-400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4 .每孔加检测溶液B工作液100μl，酶标板加上覆膜37℃温育45分钟，洗板5次，方法同3。
5. 依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色
6. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。
7. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后立即进行检测。
注意：具体操作步骤以产品说明书为准
注：
1.试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）最好控制在10分钟内， 如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶 标仪读数。
5.试剂配制：试剂在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置（如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl），以 避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
7.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
ELISA标准曲线制作
可以采用各种绘图软件来绘制ELISA标准曲线，下面以“Curve Expert1.4”软件为例，软件官方链接。
