产品名称核蛋白提取试剂盒

1.提取液制备：每300ul冷的蛋白提取液A加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂。 每200ul冷的蛋白提取液B中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2.取5-10×106个细胞，在4℃，500×g力条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4.每20ul体积细胞沉淀（约20mg，2×106个细胞）中加入200-300μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡混匀或吹打混匀，置2-8℃条件振荡10-30分钟。
5.然后在4℃，2000×g条件下离心5分钟。
6.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7.在沉淀中加入80-200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。
8.置2-8℃条件振荡30-40分钟。
9.在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
10.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
11.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。