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Annexin V-APC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒#CA011

Annexin V-APC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒
是否有货: 有货
产品总价:
产品详情

产品名称Annexin V-APC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒

应用详情

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小,重悬细胞是动作要轻柔,避免多
次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
● Annexin V-APC 和 PI 是光敏物质,在操作时请注意避光,尽量减少它们暴露在光下的时间。有必要时可以使用带盖子的冰盒
或铝箔纸避光。
● 使用 Annexin V-APC 试剂盒检测凋亡需要针对活细胞。不要固定细胞,固定操作会对结果产生干扰。
● 如果细胞样品中含有血小板,如血液样品,请使用含有 EDTA 的缓冲剂并 200g 离心洗去血小板。因为血小板含有 PS,能与
Annexin V 结合。
● 流式细胞仪检测时,细胞数量应不低于 1×105。
● 如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意用 PBS 洗净去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解 Annexin V-APC,最终导致
染色失败。
● 贴壁细胞诱导凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。中晚期凋亡细胞失去贴壁能力而漂浮于培养基,
此部分细胞对结果有显著影响,不可随意丢弃,需离心后收集与贴壁细胞一起检测,才能全面的反映出细胞凋亡的整体情况;
● 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞,胰酶消化时间过短,细胞需
要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上
磷脂酰丝氨酸与 Annexin V-APC 的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇使胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,
利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中应不用 EDTA,EDTA 影响
Annexin V 与 PS 的结合。
● 有极少数细胞株其细胞膜上 PS 的密度很低,难以染色,此时不适合用 Annexin V 方法检测凋亡。

产品描述

储存条件: 

      染色液2-8℃避光保存;

      结合液2-8℃保存;    

 

有效期: 

      一年。

 

产品简介:

      细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。

      在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。在体内,巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除,因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应,而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。

      AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。PS 外翻发生在细胞核破裂,DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前,这使得Annexin V 与PS 的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。

      在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。用标记了APC的AnnexinⅤ作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。细胞坏死的过程中也会发生细胞膜损伤,坏死的细胞会结合Annexin V-APC。

      Annexin V-APC通常与细胞膜非渗透性核酸荧光染料联合使用以检测凋亡细胞。常用的染料是PI。正常细胞和早期凋亡细胞的细胞膜是完整的,核酸染料PI不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。

       PI/Annexin V-APC试剂盒将Annexin Ⅴ与PI匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。坏死细胞可以同时与Annexin V-APC 和PI结合显色,而PI则被排除在活细胞(APC 阴性)和早期凋亡细胞(APC 阳性)之外。在没有巨噬细胞的情况下,凋亡的最后阶段会像细胞坏死一样发生整个细胞的解体,从而使凋亡晚期的细胞也同时被APC和PI结合染色呈现双阳性。

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注释

应用

  • WB免疫印迹
  • IHC免疫组化
  • IF免疫荧光
  • ICC免疫细胞化学
  • FC流式细胞
  • IP免疫沉淀
  • E酶联免疫吸附法
  • DB免疫斑点法
  • ChIP染色质免疫沉淀
  • GICA胶体金免疫层析法
  • NC阴性对照

种属反应性

  • Hu
  • Ms小鼠
  • Rt大鼠
  • Dm果蝇
  • C线虫
  • Mk
  • Rb
  • B
  • D
  • P
  • Hm仓鼠
  • ChHm中国仓鼠
  • Chk

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