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一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)#CA012

一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)
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产品总价:
产品详情

产品名称一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)

应用详情

1.1 石蜡包埋组织切片
1. 脱蜡:室温下将石蜡切片放入二甲苯中浸泡 5-10 分钟,更换新鲜的二甲苯再浸泡 5-10 分钟,以彻底脱掉
石蜡。
2. 水化:在无水乙醇中浸泡 5 分钟,更换新鲜的无水乙醇再浸泡 5 分钟。在梯度乙醇(90、 80、70%)中各浸
洗 1 次,每次 3 分钟,逐渐增加水分。
3. 洗涤:用 PBS 或 HBSS 轻轻润洗切片,并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。 此时可用石蜡笔或
疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓,以便后续操作。在实验过程中, 切勿使样品干燥,处理好的样本应
放于湿盒中保持湿润。
4. 通透:用 PBS 按照 1:100 的比例稀释 Proteinase K (2mg/ml),使其终浓度为 20μg/ml。 每个样本上滴加
100 μl 的 Proteinase K (20μg/ml),使溶液覆盖全部样本区域,20-37℃孵 育 15-30 分钟。
【注】:Proteinase K 有助于后续步骤中染色试剂的通透。孵育时间过短可能造成透性不充分从而影响标 记效率,孵育时间过
长则会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载玻片上脱落的风险。为得到最好的结果, 需要自行优化 Proteinase K 孵育的温度
和时间。
5. 洗涤:用 PBS 或 HBSS 润洗样本 2-3 次,轻轻吸干多余液体,处理好的样本放在湿盒 中保持湿润。
【注】:Proteinase K 需洗涤干净,以免干扰后续标记反应。
1.2 组织冰冻切片
1. 固定:取出冰冻切片,并回温至室温。在组织固定液或 4%多聚甲醛(配制于新鲜的 PBS)中浸泡,室温下
固定 30 分钟。
2. 洗涤:轻轻吸干多余液体,并将切片浸没在 PBS 或 HBSS 中,室温孵育 10-15 分钟。 按此步骤重复洗涤一
次,然后轻轻吸干多余液体。此时可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓,以便后续操作。在
实验过程中,切勿使样品干燥,处理好的样本应放于湿盒中保持湿润。
3. 通透:用 PBS 按照 1:100 的比例稀释 Proteinase K (2mg/ml),使其终浓度为 20μg/ml。 每个样本上滴加
100 μl 的 Proteinase K (20μg/ml),使溶液覆盖全部样本区域,室温孵育 10 分钟。(也可浸于含 0.5%
Triton X-100 的 PBS 中,室温孵育 5 分钟进行通透处理。)
【注】:Proteinase K 有助于后续步骤中染色试剂的通透。孵育时间过短可能造成透性不充分从而影响标 记效率,孵育时间
过长则会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载玻片上脱落的风险。为得到最好的结果, 需要自行优化 Proteinase K 孵育的
温度和时间。
4. 洗涤:在 PBS 或 HBSS 中浸没洗涤样本 2-3 次,并用滤纸轻轻吸干多余液体。处理好的样本放在湿盒中保
持湿润。
【注】:Proteinase K 需洗涤干净,以免干扰后续标记反应。
1.3 贴壁细胞或细胞涂片
1. 洗涤:取出制备好的细胞爬片、涂片或是细胞贴壁良好的培养板,用 PBS 或 HBSS 洗 涤一次。
2. 固定:加入组织固定液或 4%多聚甲醛(配制于新鲜的 PBS), 室温下固定 30 分钟。
3. 洗涤:用 PBS 或 HBSS 洗涤一次。
4. 通透:用 PBS 按照 1:100 的比例稀释 Proteinase K (2mg/ml),使其终浓度为 20μg/ml。 在样本上滴加适
量 Proteinase K (20μg/ml),使溶液覆盖全部样本区域,室温孵育 5 分钟。(也可使用含 0.3% Triton X-100
的 PBS,室温孵育 5 分钟进行通透处理。)
【注】:Proteinase K 有助于后续步骤中染色试剂的通透。孵育时间过短可能造成透性不充分从而影响标 记效率,孵育时间
过长则会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载玻片上脱落的风险。为得到最好的结果, 需要自行优化 Proteinase K 孵育的
温度和时间。
5. 洗涤:用 PBS 或 HBSS 洗涤 2-3 次。
【注】:Proteinase K 需洗涤干净,以免干扰后续标记反应。
1.4 悬浮细胞或细胞悬液
1. 洗涤:离心收集细胞(不超过 200 万细胞),用 PBS 或 HBSS 洗涤一次。
2. 固定:加入组织固定液(美仑货号:MA0192)或 4%多聚甲醛(配制于新鲜的 PBS), 室温下固定 30 分钟。
【注】:为防止细胞聚团,应置于摇床上缓慢摇动进行固定。
3. 洗涤:用 PBS 或 HBSS 洗涤一次。
4. 通透:用 PBS 按照 1:100 的比例稀释 Proteinase K (2mg/ml),使其终浓度为 20μg/ml。 加入适量
Proteinase K (20μg/ml)重悬细胞,室温孵育 5 分钟。(也可使用含 0.3% Triton X-100 的 PBS 重悬细胞,
室温孵育 5 分钟进行通透处理。)
【注】:Proteinase K 有助于后续步骤中染色试剂的通透。孵育时间过短可能造成透性不充分从而影响标 记效率,孵育时间
过长则会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载玻片上脱落的风险。为得到最好的结果, 需要自行优化 Proteinase K 孵育的
温度和时间。
5. 洗涤:用 PBS 或 HBSS 洗涤 2-3 次。
【注】:Proteinase K 需洗涤干净,以免干扰后续标记反应。

产品描述

 储存条件: 

-20℃保存,

TRITC-dUTP Labeling Mix需避光保存。 

有效期: 

一年

产品简介:

细胞凋亡(Apoptosis)的一个显著特点是细胞染色体DNA的降解,在一些内源性核酸内切酶的作用下,核小体间的DNA被切断,从而产生不同长度的寡聚核小体片段,表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的180-200bp DNA Ladder图谱,而坏死细胞的DNA呈弥漫的连续图谱。

Signalway Antibody一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)采用 TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick End Labeling)方法,其原理为:末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)在凋亡细胞断裂DNA3´-羟基(3´-OH)末端催化掺入四甲基罗丹明-脱氧三磷酸尿苷(TRITC-dUTP)TRITC-dUTP标记的DNA可以用荧光显微镜直接观察或者用流式细胞仪定量检测。

本试剂盒灵敏度高、特异性强、使用方便快捷。对于经过固定和洗涤的组织样本(石 蜡切片、冰冻切片)和细胞样本(贴壁细胞、悬浮细胞),只需经过一步染色,洗涤后便 可以进行凋亡检测。本试剂盒还提供了DNase I阳性对照和Proteinase K,以便操作。以50μl加样量为标准,本试剂盒可测定20次。

如果您使用该产品CA012发表了文章,请通知我们,让我们可以引用您的文献。

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注释

应用

  • WB免疫印迹
  • IHC免疫组化
  • IF免疫荧光
  • ICC免疫细胞化学
  • FC流式细胞
  • IP免疫沉淀
  • E酶联免疫吸附法
  • DB免疫斑点法
  • ChIP染色质免疫沉淀
  • GICA胶体金免疫层析法
  • NC阴性对照

种属反应性

  • Hu
  • Ms小鼠
  • Rt大鼠
  • Dm果蝇
  • C线虫
  • Mk
  • Rb
  • B
  • D
  • P
  • Hm仓鼠
  • ChHm中国仓鼠
  • Chk

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