磷酸化特异抗体

抗原制备

非修饰多肽合成 (10mg, 15aa内, >90%纯度)及偶联

1-2周

磷酸化多肽合成 (15mg, 15aa内, >90%纯度)及偶联

1-2周

动物免疫(2只新西兰大白兔）

修饰性多肽-KLH常规免疫4次，可加免1-2次

6-8周

采血

2只兔子最终放血, 每只大约30~50ml血清

2周

抗体纯化

抗原特异亲和纯化，磷酸化多肽与非磷酸化多肽特异筛选

1-2周

纯化抗体分析检测

ELISA效价检测，交付纯化的所有抗体，不少于2mg。

1-2周

合计

3-4月

抗原制备

修饰性多肽合成及偶联
10mg KLH+5mg BSA+5mg

4

非修饰性多肽及偶联
5mg BSA+5mg

修饰性多肽偶联FITC
2 mg FITC

动物免疫（2只兔子）

常规免疫4次，可加免1-2次
ELISA效价检测
可将两只兔子免疫后的抗血清提供甲方进行复检

2

脾细胞分离及阳性B细胞筛选（10块板）

选免疫结果较好的1只兔子进行B细胞分离

2

两轮高通量抗体功能验证

采用抗体膜型阳性和特异性抗原阳性，双阳性筛选
磷酸化多肽板初筛，
非磷酸化多肽板负筛
此步骤可提供所有阳性细胞上清给甲方进行样本验证

2

抗体放大生产纯化（3个）

择3条最优序列进行生产抗体，每条序列制备抗体100 ug
并3条抗体序列及剩余多肽

2

合计

3-4月