细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。
在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨
酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。AnnexinⅤ是一种分子量为 35-36kD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程
中翻转到膜外的 PS 高亲和力特异性结合。
用标记了 EGFP 的 AnnexinⅤ作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生,正常细胞和
早期凋亡细胞的细胞膜是完整的。Propidium iodide(PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡
中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。将 AnnexinⅤ与 PI 匹配使用,可以将凋亡早
期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。在双变量流式细胞仪的散点图上,左下象限显示活细胞,为
(EGFP-/PI-);右上象限是非活细胞,即坏死细胞,为(EGFP+ /PI+ );而右下象限为凋亡细胞,显现(EGFP+ /PI-)。
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