● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多
次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
● Annexin V-APC 和 PI 是光敏物质，在操作时请注意避光，尽量减少它们暴露在光下的时间。有必要时可以使用带盖子的冰盒
或铝箔纸避光。
● 使用 Annexin V-APC 试剂盒检测凋亡需要针对活细胞。不要固定细胞，固定操作会对结果产生干扰。
● 如果细胞样品中含有血小板，如血液样品，请使用含有 EDTA 的缓冲剂并 200g 离心洗去血小板。因为血小板含有 PS，能与
Annexin V 结合。
● 流式细胞仪检测时，细胞数量应不低于 1×105。
● 如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意用 PBS 洗净去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解 Annexin V-APC，最终导致
染色失败。
● 贴壁细胞诱导凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。中晚期凋亡细胞失去贴壁能力而漂浮于培养基，
此部分细胞对结果有显著影响，不可随意丢弃，需离心后收集与贴壁细胞一起检测，才能全面的反映出细胞凋亡的整体情况；
● 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞，胰酶消化时间过短，细胞需
要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI 摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上
磷脂酰丝氨酸与 Annexin V-APC 的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇使胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，
利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中应不用 EDTA，EDTA 影响
Annexin V 与 PS 的结合。
● 有极少数细胞株其细胞膜上 PS 的密度很低，难以染色，此时不适合用 Annexin V 方法检测凋亡。
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