使用方法:
使用注意事项:
1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3. 探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4. 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5. 对于药物作用时间较短(2 小时以内)的细胞,先标记探针,后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6 小时以上)的细胞,
先用活性氧阳性对照诱导剂或相应的药物刺激细胞,后标记探针。
6. 阳性对照诱导剂可以按照1:1000 的比例使用。例如标记好探针的细胞共1 毫升,可以加入1 微升的阳性对照诱导剂刺激。通
常刺激后20-30 分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞,活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。
如果在刺激后30 分钟内观察不到活性氧的升高,可以适当提高活性氧阳性对照诱导剂的浓度。如果活性氧升高得过快,可以
适当降低活性氧阳性对照诱导剂的浓度。
7. 对于某些细胞,如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强,可以按照1:2000-1:10000 稀释DCFH-DA。探针标记的时间
也可以根据情况在15-60 分钟内适当进行调整