使用方法:
使用注意事项:
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
Western 实验内参可以选用 beta-actin、GAPDH、Tubulin。
如果是脂肪含量特别高的组织样本,可选用高脂肪样本蛋白提取试剂盒。
1. 提取液制备:
每 500ul 冷的总蛋白提取液中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取 50-100mg 组织样本用剪刀剪碎,加入总蛋白提取液,用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中,在 4℃条件下振荡 20-30 分钟。
4. 在 4℃,12000g 条件下离心 10 分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得到组织总蛋白。
6. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。