使用方法：
1) 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-95%乙醇
5min-85%乙醇 5min-75%乙醇 5min-蒸馏水中待用。
2) 抗原修复：组织切片置于盛满 PH 9.0 EDTA 碱性抗原修复液或者 PH6.0 柠檬酸修复缓冲液的修复盒中于微波炉内
进行抗原修复（也可以用高压 1-2min 100 度水煮 15min 95 度水浴 20min 等其他热修复方法）。中火 8min，停火
8min，转中低火 7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸収，切勿干片。自然冷却后将玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱
色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。(修复液和修复条件根据组织类型以及抗原类型来确定）。
3) 阻断内源性过氧化物：切片放入 3%过氧化氢溶液，室温避光孵育 15 min，将玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色
摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。
4) BSA 封闭：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加用 3% BSA-PBS（或者其他封闭液）
均匀覆盖组织，室温封闭 30min。
5）加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加用抗体稀释液稀释好的的一抗 X，切片平放于避光湿盒内 4°C 孵
育过夜或者 37℃ 1-2h。（湿盒内加少量水防止抗体蒸収）
6）加免疫组化 HRP 二抗：玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。切片稍甩干后在圈
内滴加不一抗相应种属的免疫组化 HRP 二抗覆盖组织，避光室温孵育 30-50min，PBS 洗三次。
7）荧光染料反应：TYR-520 荧光染料反应 3-10min，PBS 洗三次。
8）重复 2-7 步骤（换用另外一种 TYR-XXX 荧光染料）
9）DAPI 复染细胞核：玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。切片稍甩干后在圈内滴
加 DAPI 染液，避光室温孵育 10min。
10）封片：玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂
封片。
11）镜检拍照：切片于荧光显微镜/共聚焦/多通道荧光扫描仪/多光谱成像系统下观察并采集图像。
