1、 细胞的增殖和细胞毒实验,一般可在 96 孔细胞培养板中进行。
2、 每孔加入 100 微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入 10 3 个以上
数量的细胞;细胞毒性实验每孔至少加入 5x10 3 个或以上数量的细胞 具体每孔所用的细胞的数目,需根
据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素确定 。
3、 接种的细胞按照实验需要,送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予 0 10 微升特定的药物或生长
因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予 0 10 微升抑制因子或细胞毒药物;
4、 培养结束后,取出阿尔玛蓝试剂,置室温融化混匀,于洁净工作台内按 10 微升 孔加入微孔板中,在细胞
培 养箱内继续孵育 12 24 小时,培养液颜色由蓝变为粉红(如采用荧光分光光度法,只需孵育 2 8 小
时);
5、 在 570nm 测定吸光度,参考波长 600nm 。如无此滤光片, 可用 565 nm 和 610 nm 的滤光片替代。
6、 也可用荧光分光光度法检测,激发光波长在 530 560 nm 之间,发射光波长为 590 nm 。检测时间可在结果
以荧光强度表示。