1、 每500ul抽提液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物,充分混匀后置冰上备用。
2、 将菌液在低温下10000×g离心5分钟,收集菌体,用PBS洗菌体2次。
3、 按每20mg湿重菌体样本加入500ul抽提液A(大约菌体和提取液体积比1:2-1:3,完全淹没菌体即可),混
匀,冰上放置2-3小时,中间每隔30分钟振荡混匀30秒。
4、 将菌液在低温下12000×g离心5分钟,取上清。
5、 在上清中加入10ul抽提液B,充分混匀。
6、 在37℃水浴10分钟。
7、 在37℃ 1000×g离心5分钟。
8、 小心吸取管底部大约50ul液体。
9、 用溶解液稀释该溶液,即得细菌膜蛋白样品。该样品可以用Bradford或BCA方法进行定量,调整相应的浓
度用于下游实验。